PRIC285 Double Nickase Plasmid (h): sc-406441-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PRIC285 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PRIC285 Double-Nickase-Plasmid (h) und PRIC285 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HELZ2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PRIC285 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406441-NIC | 20 µg | $410.00 |
HELZ2 (auch als PRIC285 beschrieben) kodiert einen helicaseähnlichen transkriptionellen Ko-Regulator, der daran beteiligt ist, die Signalübertragung nukleärer Rezeptoren mit Genexpressionsprogrammen zu koppeln, die den Lipidstoffwechsel und Entzündungsreaktionen steuern. Es wirkt an der transkriptionellen Regulation nachgeschaltet zu Rezeptoren wie PPARs und verwandten metabolischen Regulatoren mit und beeinflusst Signalwege, die mit Adipogenese, Insulinsensitivität und angeborener Immun-Signalgebung verknüpft sind. Eine veränderte HELZ2/PRIC285-Aktivität wurde mit einer gestörten metabolischen Homöostase und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Rolle als mechanistischer Knotenpunkt unterstreicht, der Stoffwechsel und transkriptionelle Regulation verbindet. Diese Funktionen machen HELZ2 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung genregulatorischer Netzwerke in Hepatozyten, Adipozyten und aus Immunzellen abgeleiteten Zellmodellen.
PRIC285 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HELZ2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HELZ2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HELZ2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HELZ2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.