Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRIC285 (h): sc-406441

Présentation

HELZ2 code pour PRIC285, un facteur putatif de type hélicase impliqué dans la régulation transcriptionnelle via la coactivation des récepteurs nucléaires et le métabolisme des ARN associés à la chromatine. PRIC285 a été associé à des programmes géniques métaboliques gouvernés par PPAR et des voies apparentées, le reliant à l’homéostasie lipidique, à la fonction mitochondriale et à la signalisation inflammatoire. Des altérations de l’activité de HELZ2 ont été rapportées dans des contextes de dérégulation métabolique et de remodelage transcriptionnel associé aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des réseaux de régulation génique et des transitions d’état cellulaire. Ses fonctions nucléaires font de HELZ2 un nœud utile pour disséquer les interactions (« crosstalk ») entre transcription, maturation des ARN et programmes de réponse au stress dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRIC285 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HELZ2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HELZ2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HELZ2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRIC285.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HELZ2 pour l'étude de la signalisation de PRIC285, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HELZ2 essentiels à la fonction de PRIC285
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HELZ2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRIC285 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PRIC285 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HELZ2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRIC285 plasmide HDR (h) et le PRIC285 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HELZ2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HELZ2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.