Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRH1 (m): sc-422429

Présentation

Prh1 code PRH1, une protéine sécrétée riche en proline, principalement associée aux glandes salivaires et aux tissus de la muqueuse buccale chez la souris. PRH1 serait impliquée dans la composition de la salive et les fonctions locales de barrière en participant à des réseaux protéiques extracellulaires qui influencent la lubrification et la protection de la muqueuse. En tant que facteur sécrété à expression restreinte à certains tissus, Prh1 est utile pour étudier les programmes de différenciation épithéliale et la régulation génique dans les glandes exocrines. Des modifications de l’expression des protéines salivaires peuvent être instructives dans des modèles d’inflammation buccale, de dysfonctionnement des glandes salivaires et de changements de l’homéostasie muqueuse induits par l’environnement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRH1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prh1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prh1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prh1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRH1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prh1 pour l'étude de la signalisation de PRH1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prh1 essentiels à la fonction de PRH1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prh1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRH1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prh1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRH1 plasmide HDR (m) et le PRH1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prh1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prh1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.