prefoldin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423658

Übersicht

Vbp1 kodiert Prefoldin 3, eine Ko-Chaperon-Komponente der prefoldinähnlichen Maschinerie, die die zytosolische Proteinhomöostase unterstützt, indem sie bei der Faltung und Stabilisierung ausgewählter Client-Proteine hilft. Prefoldin 3 trägt zu Proteostase-Netzwerken bei, die mit der Organisation des Zytoskeletts, der Assemblierung makromolekularer Komplexe und der Koordination mit Chaperon-Signalwegen verknüpft sind, welche Proteinfehlfaltung unter zellulärem Stress begrenzen. Über diese Prozesse kann die Vbp1-Aktivität den Zellzyklusverlauf, die Stressanpassung sowie das Gleichgewicht zwischen Proteinfaltung und -abbau beeinflussen. Eine Fehlregulation chaperonassoziierter Signalwege ist für Modelle proteotoxischen Stresses und der Neurodegeneration relevant, in denen eine veränderte Faltungskapazität und Qualitätskontrolle krankheitsassoziierte Phänotypen modifizieren können.

Das prefoldin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vbp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vbp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vbp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die prefoldin 3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vbp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der prefoldin 3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vbp1-Exone abzielen, die für die prefoldin 3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vbp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom prefoldin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom prefoldin 3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vbp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das prefoldin 3 HDR-Plasmid (m) und prefoldin 3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vbp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vbp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.