Pre-TCRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422473

Übersicht

Ptcra kodiert die murine Prä‑T‑Zellrezeptor‑Alpha‑Kette (Prä‑TCRα), eine wesentliche Komponente des Prä‑TCR‑Komplexes, der in sich entwickelnden Thymozyten exprimiert wird. Prä‑TCRα paart sich mit TCRβ zu einem signalgebenden Rezeptor, der die β‑Selektion fördert und so Proliferation, Überleben und den Übergang vom doppelt negativen zum doppelt positiven Stadium vorantreibt. Die Prä‑TCR‑Signalgebung aktiviert Kinasekaskaden und transkriptionelle Programme, die mit der Thymozytendifferenzierung verknüpft sind, darunter LCK/ZAP70‑abhängige Signalwege sowie nachgeschaltete MAPK‑ und PI3K‑AKT‑Signalgebung. Fehlregulierte, mit PTCRA assoziierte Kontrollpunkte können die T‑Zellentwicklung und die Repertoirebildung stören und bieten damit einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung von Immundefizienz und T‑zellgetriebener Pathophysiologie in Mausmodellen.

Das Pre-TCRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ptcra-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ptcra-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ptcra nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Pre-TCRα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ptcra-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Pre-TCRα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ptcra-Exone abzielen, die für die Pre-TCRα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ptcra-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Pre-TCRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Pre-TCRα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ptcra-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Pre-TCRα HDR-Plasmid (m) und Pre-TCRα HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ptcra-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ptcra-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.