Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pre-TCRα (m): sc-422473

Présentation

Ptcra code pour la chaîne alpha du pré‑récepteur des lymphocytes T (pré‑TCRα) chez la souris, un composant essentiel du complexe pré‑TCR exprimé dans les thymocytes en développement. Le pré‑TCRα s’associe à TCRβ pour former un récepteur de signalisation qui favorise la sélection β, en stimulant la prolifération et la survie, et en permettant la transition du stade double négatif au stade double positif. La signalisation du pré‑TCR active des cascades de kinases et des programmes transcriptionnels liés à la différenciation des thymocytes, notamment des voies dépendantes de LCK/ZAP70 ainsi que les voies MAPK et PI3K–AKT en aval. Des points de contrôle associés à PTCRA dérégulés peuvent perturber le développement des lymphocytes T et la formation du répertoire, offrant une porte d’entrée mécanistique pour étudier l’immunodéficience et la physiopathologie dépendante des lymphocytes T dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pre-TCRα (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptcra dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptcra, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptcra à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pre-TCRα.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptcra pour l'étude de la signalisation de Pre-TCRα, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ptcra essentiels à la fonction de Pre-TCRα
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptcra pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pre-TCRα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pre-TCRα plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptcra. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pre-TCRα plasmide HDR (m) et le Pre-TCRα (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptcra pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptcra définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.