PRDM1/Blimp-1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419334-ACT

Das Mausgen *Prdm1* codiert den transkriptionellen Repressor PRDM1/Blimp-1, einen PR/SET-Domäne-enthaltenden Faktor, der Programme der terminalen Differenzierung in Immun- und Epithellinien koordiniert. PRDM1 verknüpft Zytokin- und Antigenrezeptor-Signalgebung mit Chromatin-Remodelling, um proliferationsfördernde Gennetzwerke zu reprimieren und gleichzeitig linienspezifische Transkriptionszustände zu fördern, darunter die Reifung von Plasmazellen und die Differenzierung von Effektor-T-Zellen. Es moduliert Signalwege, die mit B‑Zell‑Rezeptor- und interferonvermittelten Antworten verknüpft sind, und trägt durch Interaktionen mit Korepressoren und epigenetischen Regulatoren zur Etablierung transkriptioneller Stilllegung bei. Eine fehlregulierte PRDM1-Aktivität oder -Expression ist mit einer veränderten Immunhomöostase assoziiert und wurde im Kontext der Biologie lymphoider Malignome, der Entzündungsregulation sowie von Differenzierungsdefekten in Entwicklungs- und Gewebemodellen untersucht.

PRDM1/Blimp-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Prdm1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRDM1/Blimp-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Prdm1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Prdm1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRDM1/Blimp-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Prdm1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRDM1/Blimp-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRDM1/Blimp-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Prdm1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.