Plasmide Double Nickase (h) PRC1: sc-401679-NIC

PRC1 (protein regulator of cytokinesis 1) est une protéine conservée associée aux microtubules qui relie entre eux des microtubules antiparallèles dans la zone médiane du fuseau et est indispensable à l’assemblage du fuseau central, au positionnement du sillon de clivage et à l’achèvement de la cytokinèse. Son activité est coordonnée avec des kinases mitotiques et des protéines motrices afin d’assurer une ségrégation fidèle des chromosomes et l’abscission, reliant ainsi PRC1 aux voies fondamentales du cycle cellulaire et du fuseau mitotique. Une dérégulation de l’expression ou de la fonction de PRC1 peut perturber la fidélité de la division cellulaire et la stabilité du génome, des caractéristiques souvent étudiées dans le contexte des troubles prolifératifs et de la biologie tumorale. PRC1 est donc largement utilisée comme point d’entrée moléculaire pour disséquer la progression mitotique, l’architecture du fuseau et le contrôle des points de contrôle de la cytokinèse dans les cellules humaines.

PRC1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRC1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.