PRAME Lentiviral Activation Particles (h): sc-404682-LAC

PRAME (preferentially expressed antigen in melanoma) kodiert ein Krebs‑Hoden‑Antigen, das in erster Linie als Transkriptionsregulator fungiert und am besten als dominanter Repressor der Signalübertragung über Retinsäurerezeptoren charakterisiert ist. Durch die Modulation retinoidabhängiger Genexpressionsprogramme kann PRAME zelluläre Differenzierung, Proliferation und Überlebenswege beeinflussen – auch in Situationen, in denen Retinsäure normalerweise die Reifung oder eine Wachstumsbegrenzung fördert. Eine aberrante PRAME‑Expression wird in zahlreichen Tumorarten beschrieben und PRAME wird in Studien zur Tumorimmunbiologie und Antigenpräsentation häufig als molekularer Marker verwendet. In normalen Geweben ist die PRAME‑Expression typischerweise stark eingeschränkt, wodurch PRAME ein nützliches Modell für die Untersuchung epigenetischer Regulation und linien-/gewebespezifischer transkriptioneller Kontrolle darstellt.

PRAME Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PRAME-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PRAME Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PRAME-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PRAME-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PRAME-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.