Plásmido CRISPR de Activación (h) PRAME: sc-404682-ACT

PRAME (antígeno expresado preferentemente en melanoma) codifica un antígeno cáncer-testículo que funciona principalmente como regulador transcripcional, conocido sobre todo por reprimir la señalización del receptor de ácido retinoico y atenuar los programas de diferenciación impulsados por retinoides. Al modular la transcripción dependiente de receptores nucleares y el control epigenético asociado, PRAME puede influir en la progresión del ciclo celular, el compromiso de linaje y la expresión de genes relacionados con la apoptosis. Se ha descrito una expresión aberrante de PRAME en múltiples contextos tumorales y con frecuencia se utiliza como marcador molecular en estudios sobre estado oncogénico, reconocimiento inmunitario y plasticidad de las células tumorales. En modelos celulares humanos, la perturbación de PRAME permite investigar cómo las redes transcripcionales alteradas y las señales de diferenciación contribuyen a fenotipos malignos y a perfiles de expresión de antígenos.

PRAME El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRAME sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PRAME El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRAME en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRAME, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PRAME. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRAME y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PRAME en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PRAME en células tumorales con expresión de PRAME silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.