PPP2R3A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402433-ACT

PPP2R3A kodiert die regulatorische B″/PR72‑Untereinheit der Proteinphosphatase 2A (PP2A), einer wichtigen Serin/Threonin‑Phosphatase, die Phospho‑Signalwege prägt, indem sie Substraterkennung und subzelluläre Zielsteuerung des PP2A‑Holoenzyms bestimmt. Über die PP2A‑abhängige Kontrolle des Kinase‑Phosphatase‑Gleichgewichts ist PPP2R3A an der Koordination der Zellzyklus‑Progression, an DNA‑Schadensantworten sowie an umfassenderen Signaltransduktionsprogrammen beteiligt, die Stoffwechsel und Stressanpassung beeinflussen. Eine veränderte Zusammensetzung regulatorischer PP2A‑Untereinheiten ist häufig mit fehlregulierten Phosphorylierungsnetzwerken assoziiert, wie sie bei proliferativen und neurobiologischen Erkrankungen beobachtet werden, wodurch PPP2R3A für die Analyse von Pathway‑Rewiring relevant ist. Die Modulation der PPP2R3A‑Expression ist daher nützlich, um die phosphatasevermittelte Regulation von Wachstum und Signal‑Knotenpunkten in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

PPP2R3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PPP2R3A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PPP2R3A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PPP2R3A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PPP2R3A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PPP2R3A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PPP2R3A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PPP2R3A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PPP2R3A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PPP2R3A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.