Plásmido CRISPR de Activación (h) PPP2R3A: sc-402433-ACT

PPP2R3A codifica una subunidad reguladora B″/PR72 de la proteína fosfatasa 2A (PP2A), una importante fosfatasa de serina/treonina que modula la señalización por fosforilación al dirigir el reconocimiento de sustratos y la localización subcelular del holoenzima de PP2A. A través del control dependiente de PP2A del equilibrio entre quinasas y fosfatasas, PPP2R3A participa en la coordinación de la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y programas más amplios de transducción de señales que influyen en el metabolismo y la adaptación al estrés. La alteración en la composición de las subunidades reguladoras de PP2A se asocia con frecuencia a redes de fosforilación desreguladas observadas en trastornos proliferativos y neurobiológicos, lo que hace que PPP2R3A sea relevante para analizar la reprogramación de vías. Por lo tanto, modular la expresión de PPP2R3A es útil para estudiar la regulación mediada por fosfatasas de nodos de crecimiento y señalización en modelos celulares humanos.

PPP2R3A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP2R3A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PPP2R3A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP2R3A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP2R3A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PPP2R3A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP2R3A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PPP2R3A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PPP2R3A en células tumorales con expresión de PPP2R3A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.