Plásmido CRISPR de Activación (h) PPP1R12C: sc-412332-ACT

PPP1R12C codifica MYPT3, una subunidad reguladora de la fosfatasa de miosina que dirige la fosfatasa de proteínas 1 (PP1) hacia la miosina II y sustratos relacionados para modular la contractilidad actomiosínica. Al modelar la dinámica de fosforilación de la cadena ligera de miosina, PPP1R12C contribuye a la organización del citoesqueleto, la adhesión celular, la motilidad y las vías de mecanotransducción que influyen en la arquitectura tisular y la función de barrera. La regulación alterada de la desfosforilación dependiente de PP1 se ha vinculado con una migración celular desregulada y con señales de contracción anómalas, procesos comúnmente implicados en la biología cardiovascular y del cáncer. Como nodo que conecta el direccionamiento de fosfatasas con la contractilidad impulsada por RhoA/ROCK, PPP1R12C es relevante para estudios de redes de señalización por fosforilación y fenotipos dependientes del citoesqueleto.

PPP1R12C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PPP1R12C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PPP1R12C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PPP1R12C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PPP1R12C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PPP1R12C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PPP1R12C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PPP1R12C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PPP1R12C en células tumorales con expresión de PPP1R12C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.