Plásmido Doble Nickase (h) PPARγ: sc-400030-NIC

PPARG codifica el receptor activado por proliferadores de peroxisomas gamma (PPARγ), un receptor nuclear activado por ligando que forma heterodímeros con RXR para regular programas transcripcionales que controlan la adipogénesis, la captación y el almacenamiento de lípidos, y la sensibilidad a la insulina. PPARγ integra señales metabólicas e inflamatorias modulando vías como el metabolismo de ácidos grasos, la homeostasis de la glucosa y la polarización de macrófagos, lo que influye en la señalización de citocinas y la remodelación tisular. La alteración de la actividad o la expresión de PPARG se asocia con disfunción metabólica, incluida la obesidad, la resistencia a la insulina y la dislipidemia, y también se estudia en contextos como la esteatosis hepática y los trastornos inflamatorios. Dado que actúa como un nodo central de regulación transcripcional, PPARG se analiza con frecuencia para cartografiar redes reguladoras génicas y transiciones de estado metabólico en modelos de células humanas.

PPARγ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PPARG en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PPARG. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PPARG. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PPARG alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.