PP2B-B1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422386

Übersicht

Ppp3r1 kodiert die regulatorische Untereinheit B1 der PP2B (Calcineurin B1), einen essenziellen Ca2+-bindenden Partner, der die Calcineurin-Phosphataseaktivität stabilisiert und moduliert. Über Ca2+/Calmodulin-abhängige Signalwege steuert Calcineurin die Dephosphorylierung von Substraten wie den NFAT-Transkriptionsfaktoren und verknüpft so Calciumflüsse mit Transkriptionsprogrammen, die Immunaktivierung, neuronale Plastizität und Muskelumbau regulieren. In Mausmodellen überschneidet sich PPP3R1-abhängige Signalgebung mit Signalwegen, die T‑Zell‑Rezeptorantworten, synaptische Funktion und das mit kardialer Hypertrophie assoziierte Remodeling steuern, wodurch sie für Studien zu Entzündung, Neurobiologie und stressadaptiver Signalgebung relevant ist. Eine fehlregulierte Calcineurin-Aktivität wird breit mit pathologischem Remodeling und Immundysfunktion in Verbindung gebracht, wodurch PP2B‑B1 als mechanistischer Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen in krankheitsrelevanten Systemen positioniert ist.

Das PP2B-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp3r1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp3r1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp3r1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PP2B-B1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp3r1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PP2B-B1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppp3r1-Exone abzielen, die für die PP2B-B1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp3r1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PP2B-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PP2B-B1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp3r1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PP2B-B1 HDR-Plasmid (m) und PP2B-B1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp3r1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp3r1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.