PP2B-Aγ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422385

Panoramica

Ppp3cc codifica la subunità catalitica gamma della calcineurina (PP2B-Aγ), una fosfatasi serina/treonina Ca2+/calmodulina-dipendente che collega i segnali intracellulari del calcio a programmi di defosforilazione che controllano la trascrizione e la dinamica del citoscheletro. PP2B-Aγ contribuisce a reti di segnalazione calcio-dipendenti, come la regolazione di NFAT, il rimodellamento associato all’attività sinaptica e l’espressione genica dipendente dallo stimolo in diversi tipi cellulari eccitabili e correlati al sistema immunitario. Attraverso la modulazione degli stati di fosforilazione di intermedi chiave della segnalazione, la calcineurina influenza processi quali plasticità neuronale, sviluppo e transizioni di stato cellulare. L’attività disregolata della via della calcineurina è ampiamente studiata in ambito neurobiologico e della segnalazione immunitaria, offrendo quadri rilevanti per la malattia per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale guidato dal calcio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2B-Aγ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp3cc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp3cc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp3cc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2B-Aγ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp3cc per lo studio della segnalazione di PP2B-Aγ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp3cc critici per la funzione di PP2B-Aγ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp3cc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp3cc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PP2B-Aγ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2B-Aγ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp3cc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp3cc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.