PP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422385

概要

Ppp3cc は、カルシニューリン（PP2B-Aγ）のγ触媒サブユニットをコードする。カルシニューリンは Ca2+/カルモジュリン依存性のセリン/スレオニンホスファターゼであり、細胞内カルシウムシグナルを、転写や細胞骨格ダイナミクスを制御する脱リン酸化プログラムへと結び付ける。PP2B-Aγ は、NFAT の制御、シナプス活動に伴うリモデリング、刺激依存的な遺伝子発現など、興奮性細胞および免疫関連細胞種にまたがるカルシウム依存性シグナル伝達ネットワークに寄与する。主要なシグナル伝達中間体のリン酸化状態を調節することで、カルシニューリンは神経可塑性、発生、細胞状態の遷移などの過程に影響を及ぼす。カルシニューリン経路活性の破綻は神経生物学や免疫シグナルの文脈で広く研究されており、カルシウム駆動性の転写制御の機構研究に疾患関連の枠組みを提供している。

PP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPpp3cc遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ppp3cc内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ppp3ccのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PP2B-Aγタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PP2B-Aγシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ppp3cc欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PP2B-Aγの機能に不可欠なPpp3ccエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ppp3ccゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびPP2B-Aγ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ppp3cc遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PP2B-Aγ HDRプラスミド（m）および PP2B-Aγ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPpp3ccホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPpp3cc標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。