Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2A-Cβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400937
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP2A-Cβ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP2A-Cβ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP2A-Cα/β Antibody (1D6): sc-80665
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP2A-Cβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400937 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PPP2CB codifica la subunità catalitica beta della proteina fosfatasi 2A (PP2A-Cβ), una delle principali fosfatasi serina/treonina che forma oloenzimi PP2A eterotrimerici con diverse subunità regolatorie di tipo B per controllare la specificità di substrato e la localizzazione subcellulare. PP2A-Cβ controbilancia la segnalazione delle chinasi defosforilando nodi chiave in vie che governano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la segnalazione da stress, incluse AKT/MAPK e molteplici regolatori mitotici. Attraverso queste attività, PP2A contribuisce a mantenere l’omeostasi della fosforilazione influenzando programmi trascrizionali, dinamiche del citoscheletro e controllo metabolico. Una segnalazione di PP2A deregolata e alterazioni dell’espressione o della regolazione di PPP2CB sono state collegate a proliferazione anomala e segnali di sopravvivenza aberranti, con rilevanza per l’oncologia e per studi di neurobiologia incentrati su reti di segnalazione dipendenti dalle fosfatasi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2A-Cβ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PPP2CB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PPP2CB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PPP2CB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2A-Cβ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PPP2CB per lo studio della segnalazione di PP2A-Cβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PPP2CB critici per la funzione di PP2A-Cβ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PPP2CB per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PP2A-Cβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PPP2CB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP2A-Cβ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PP2A-Cβ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PPP2CB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PPP2CB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.