Plasmide CRISPR d'Activation (h) PP2A-B56-β: sc-403233-ACT

PPP2R5B code la sous-unité régulatrice B56β de la PP2A, membre de la famille B56 qui oriente l’assemblage de l’holoenzyme protéine phosphatase 2A et la spécificité de ses substrats. En ciblant la PP2A vers des complexes définis, PP2A‑B56β contribue au contrôle dynamique des voies de signalisation dépendantes de la phosphorylation, notamment la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la régulation du point de contrôle mitotique. La déphosphorylation guidée par PP2A‑B56β interfère également avec des nœuds des voies PI3K/AKT et MAPK via la régulation de substrats kinases et de protéines échafaudages, façonnant des programmes de prolifération et d’adaptation au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de PP2A‑B56β a été associée à une signalisation aberrante et à des phénotypes d’instabilité génomique fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans d’autres troubles prolifératifs.

PP2A-B56-β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP2R5B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PP2A-B56-β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP2R5B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP2R5B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PP2A-B56-β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP2R5B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PP2A-B56-β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PP2A-B56-β dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP2R5B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.