Plasmide CRISPR d'Activation (h) PP2A-B55-δ: sc-404806-ACT

PPP2R2D code la sous-unité régulatrice B55δ de la protéine phosphatase 2A (PP2A), une phosphatase majeure des résidus Ser/Thr qui module l’intensité des signaux en orientant l’activité catalytique de PP2A vers des substrats spécifiques. PP2A‑B55δ contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire et de la levée des points de contrôle en régulant la dynamique de phosphorylation lors de la sortie de mitose et d’autres transitions dépendantes de la phosphorylation, avec des effets en aval sur la prolifération et les réponses au stress. Par son intégration avec des voies pilotées par des kinases, notamment des réseaux liés aux signalisations MAPK et PI3K/AKT, une expression altérée de PPP2R2D ou un déséquilibre des complexes PP2A‑B55δ peut remodeler l’état du phosphoprotéome. La dérégulation de la composition des holoenzymes PP2A est fréquemment étudiée en biologie du cancer et en neurobiologie comme mécanisme influençant la stabilité génomique, la différenciation et la signalisation neuronale.

PP2A-B55-δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PPP2R2D sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PP2A-B55-δ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PPP2R2D dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PPP2R2D, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PP2A-B55-δ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PPP2R2D natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PP2A-B55-δ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PP2A-B55-δ dans les cellules tumorales présentant une expression de PPP2R2D silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.