POT1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-403275-LAC

A POT1 humana (proteção dos telômeros 1) codifica um componente central do complexo shelterin que se liga à extremidade telomérica 3′ de fita simples, limitando a sinalização aberrante de dano ao DNA dependente de ATR e regulando o acesso da telomerase. Ao coordenar a proteção (capping) dos telômeros, o processamento das extremidades e a progressão da forquilha de replicação através das repetições teloméricas, a POT1 ajuda a preservar a integridade das extremidades cromossômicas e a estabilidade do genoma. A disrupção da função de POT1 está associada à disfunção telomérica, a alterações na homeostase do comprimento dos telômeros e ao aumento da instabilidade cromossômica, processos relevantes para estudos de predisposição tumoral e para a biologia associada a neoplasias hematológicas e cutâneas. Assim, a POT1 é amplamente utilizada como um ponto de referência para investigar vias de resposta a dano ao DNA, estresse replicativo em DNA repetitivo e mecanismos que controlam a manutenção dos telômeros.

As Partículas de Ativação Lentivirais POT1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de POT1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais POT1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição POT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de POT1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo POT1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.