POT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403275-ACT

POT1 (proteção dos telômeros 1) codifica um componente central do complexo shelterin que se liga ao DNA telomérico de fita simples e regula a proteção das extremidades dos telômeros. Ao controlar o acesso da telomerase e limitar a sinalização inadequada de dano ao DNA dependente de ATR nos terminais cromossômicos, a POT1 ajuda a manter a homeostase do comprimento dos telômeros e a estabilidade do genoma. A função alterada de POT1 está associada à disfunção telomérica, ao estresse de replicação e à instabilidade cromossômica, processos que influenciam a senescência celular e a transformação oncogênica. Como fator de manutenção de telômeros, POT1 é amplamente estudada em vias que regulam a replicação do DNA, a resposta a danos e o processamento das extremidades cromossômicas.

POT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de POT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

POT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus POT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição POT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de POT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus POT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de POT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via POT1 em células tumorais com expressão de POT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.