PORCN Lentiviral Activation Particles (h): sc-413044-LAC

Das humane PORCN-Gen kodiert eine membrangebundene O‑Acyltransferase im endoplasmatischen Retikulum, die die Palmitoleoylierung von WNT‑Liganden katalysiert – eine Modifikation, die für die Sekretion von WNT, die Rezeptorbindung und die Ausbildung von WNT‑Gradienten erforderlich ist. Durch die Kontrolle der Reifung von WNT‑Liganden reguliert PORCN sowohl die kanonische, β‑Catenin‑abhängige Transkription als auch die nicht‑kanonische WNT/Planar‑Cell‑Polarity‑Signalgebung und beeinflusst damit Proliferation, Differenzierung, Polarität und Gewebemusterung. Störungen der PORCN‑abhängigen WNT‑Signalübertragung werden mit Entwicklungsstörungen sowie mit Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, in denen die Aktivität des WNT‑Signalwegs fehlreguliert ist, darunter Krebserkrankungen und fibrotische Umbauprozesse. Als vorgeschalteter, geschwindigkeitsbestimmender Knotenpunkt der WNT‑Ligandenproduktion ist PORCN ein nützliches Ziel für mechanistische Untersuchungen des Pathway‑Outputs und der Dynamik parakriner Signalübertragung.

PORCN Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PORCN-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PORCN Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PORCN-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PORCN-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PORCN-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.