PON2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403181-ACT

A PON2 (paraoxonase 2) humana é uma lactonase associada à membrana, expressa de forma ubíqua, com atividade antioxidante que limita a peroxidação lipídica e ajuda a preservar a integridade da membrana sob estresse oxidativo. A PON2 modula a homeostase redox e a função mitocondrial ao atenuar a geração de espécies reativas de oxigênio e influenciar a sinalização de resposta ao estresse, incluindo vias ligadas à inflamação e à regulação metabólica. Alterações na expressão e na atividade da PON2 têm sido associadas a processos relevantes para a aterosclerose, a resistência à insulina e a sobrevivência de células tumorais, nos quais mudanças no equilíbrio oxidativo podem remodelar a aptidão celular e os desfechos de sinalização. Como resultado, a PON2 é frequentemente estudada em modelos de disfunção endotelial, biologia de macrófagos, estresse mitocondrial e fenótipos impulsionados por dano oxidativo.

PON2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PON2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PON2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PON2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PON2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PON2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PON2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PON2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PON2 em células tumorais com expressão de PON2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.