POMC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400592

Übersicht

POMC (Proopiomelanocortin) kodiert ein sekretorisches Prohormon, das proteolytisch in mehrere bioaktive Peptide prozessiert wird, darunter ACTH und Melanozyten-stimulierende Hormone, die endokrine Stress-Signalwege, Energiehomöostase, Pigmentierung und Nozizeption koordinieren. In hypophysären Kortikotrophen treibt das aus POMC abgeleitete ACTH über Melanocortinrezeptor-vermittelte Signalwege die adrenale Steroidogenese an und verknüpft so die Aktivität der Hypothalamus–Hypophysen–Nebennierenrinden-Achse mit systemischen metabolischen und immunologischen Antworten. Die POMC-Prozessierung hängt von einem regulierten Transport im sekretorischen Weg und von Prohormon-Konvertasen ab und ist in cAMP/PKA-Signalisierung sowie Programme der neuroendokrinen Differenzierung eingebettet. Eine Fehlregulation oder ein Funktionsverlust von POMC ist mit Störungen der Nebennierenfunktion, Adipositas- und Hyperphagie-Phänotypen sowie mit veränderter Melanocortin-Signalisierung assoziiert, was für die neuroendokrine und metabolische Forschung relevant ist.

Das POMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POMC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POMC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POMC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die POMC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POMC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der POMC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POMC-Exone abzielen, die für die POMC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POMC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom POMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom POMC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POMC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das POMC HDR-Plasmid (h) und POMC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POMC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POMC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.