Particules Lentivirales d'Activation (h) POLR3GL: sc-413599-LAC

POLR3GL code une sous-unité centrale de l’ARN polymérase III qui contribue à la transcription de petits ARN non codants, notamment les ARNt, l’ARNr 5S et d’autres transcrits dépendants de Pol III, essentiels à la capacité de synthèse protéique et à l’homéostasie cellulaire. En régulant la production de Pol III, POLR3GL influence des programmes liés à la croissance, les réponses cellulaires au stress et des voies de détection immunitaire innée associées à des espèces d’ARN cytosoliques. Des altérations de la fonction de Pol III et une biogenèse dérégulée des petits ARN ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux ainsi qu’à des mécanismes plus larges pertinents pour le contrôle transcriptionnel dans les tissus prolifératifs et à forte activité métabolique. POLR3GL constitue donc un point d’entrée utile pour étudier la régulation transcriptionnelle de Pol III, le métabolisme de l’ARN et les effets en aval sur les transitions d’état cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales POLR3GL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de POLR3GL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales POLR3GL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription POLR3GL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de POLR3GL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif POLR3GL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.