POLR3GL CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413599-ACT

Das humane Gen **POLR3GL** codiert eine kleine Untereinheit der RNA-Polymerase III, die die Transkription kurzer nichtkodierender RNAs unterstützt, darunter tRNAs, 5S-rRNA und weitere Pol-III-abhängige RNAs, die für die Translationskapazität und die zelluläre Homöostase essenziell sind. **POLR3GL** trägt zur Assemblierung des Pol-III-Komplexes und zur promotorabhängigen Initiation bei und verknüpft seine Aktivität damit mit Wachstumssteuerung, Stressanpassung und Signalwegen der angeborenen Immunität, die durch Pol-III-abgeleitete RNAs beeinflusst werden. Eine Fehlregulation von Pol-III-Transkriptionsprogrammen ist breit relevant für proliferative und entwicklungsbezogene Phänotypen, was **POLR3GL** zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um zu untersuchen, wie eine veränderte Ausgabe nichtkodierender RNAs Genexpressionsnetzwerke umgestaltet. Die Untersuchung der **POLR3GL**-Funktion kann Mechanismen aufklären, die Pol-III-Aktivität mit transkriptioneller Regulation, Anforderungen an die Proteinsynthese und krankheitsassoziierten zellulären Zuständen verbinden.

POLR3GL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen POLR3GL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

POLR3GL Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des POLR3GL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der POLR3GL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen POLR3GL-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native POLR3GL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von POLR3GL-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des POLR3GL-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem POLR3GL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.