POLDIP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413603

Übersicht

POLDIP3 (polymerase delta interacting protein 3), auch bekannt als SKAR, ist ein RNA-bindendes Protein, das das Spleißen von mRNA mit der Translation koppelt und die effiziente Synthese von Proteinen unterstützt, die für das Zellwachstum erforderlich sind. Es wirkt nachgeschaltet der mTOR-Signalkaskade, wobei phosphorylierungsabhängige Interaktionen dazu beitragen, die Initiation der Translation und die Rekrutierung von Ribosomen an gespleißte Transkripte zu koordinieren. POLDIP3 wird außerdem mit der Regulation von Signalwegen zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität in Verbindung gebracht, unter anderem über Interaktionen mit DNA-Polymerase-Komplexen, wodurch proliferative Signale mit replikationsassoziierten Prozessen verknüpft werden. Eine Fehlregulation dieser Netzwerke der RNA-Verarbeitung und Wachstumskontrolle ist relevant für Studien zur malignen Transformation, zu zellulären Stressantworten und zu proliferativen Erkrankungen.

Das POLDIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des POLDIP3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des POLDIP3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von POLDIP3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die POLDIP3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von POLDIP3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der POLDIP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf POLDIP3-Exone abzielen, die für die POLDIP3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere POLDIP3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom POLDIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom POLDIP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des POLDIP3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das POLDIP3 HDR-Plasmid (h) und POLDIP3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von POLDIP3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten POLDIP3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.