Plásmido Doble Nickase (h) POL H: sc-401794-NIC

POLH codifica la polimerasa eta de ADN (POL H), una polimerasa de síntesis translesión de la familia Y que permite la replicación a través de lesiones voluminosas en el ADN, en particular los dímeros de pirimidina ciclobutano inducidos por UV, limitando así el estancamiento de la horquilla de replicación y la inestabilidad genómica. POL H actúa dentro de las vías de tolerancia al daño del ADN y de reparación posreplicativa, coordinándose con la ubiquitinación de PCNA y el eje RAD6/RAD18 para alternar entre polimerasas replicativas y polimerasas de bypass de lesión. Los defectos en POLH alteran el bypass preciso de lesiones y aumentan la mutagénesis, vinculando la actividad de POLH con vías que determinan la integridad genómica bajo estrés genotóxico. Por ello, POLH se estudia ampliamente en los mecanismos de respuesta a la radiación UV, las firmas mutacionales y la biología del estrés replicativo en células humanas.

POL H El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus POLH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de POLH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de POLH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con POLH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.