POGZ CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410566-ACT

POGZ (vom Pogo-Transposon abgeleitetes Protein mit Zinkfinger) ist ein nukleärer, mit Chromatin assoziierter Faktor, der Transkriptionsprogramme reguliert, indem er DNA-Bindung und Protein-Protein-Interaktionen an genregulatorischen Regionen koordiniert. Es trägt zur Chromatinorganisation und Genomstabilität bei, indem es über Interaktionen mit heterochromatin-assoziierten Maschinerien die Mitoseprogression und die Kohäsion der Schwesterchromatiden beeinflusst und dadurch die Zellzykluskontrolle sowie entwicklungsbezogene Genexpressionsnetzwerke mitprägt. Eine Fehlregulation der POGZ-abhängigen Chromatinregulation wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter neuronaler Differenzierung in Verbindung gebracht, was POGZ für Studien zur Transkriptionskontrolle in der Gehirnentwicklung relevant macht. In menschlichen Zellen wird POGZ häufig im Kontext epigenetischer Regulation, der Festlegung des Zellschicksals und von Signalweg-Effekten auf RNA-Expressionsprogramme untersucht.

POGZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen POGZ-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

POGZ Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des POGZ-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der POGZ-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen POGZ-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native POGZ-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von POGZ-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des POGZ-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem POGZ-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.