POFUT1 Double Nickase Plasmid (h): sc-406276-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das POFUT1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- POFUT1 Double-Nickase-Plasmid (h) und POFUT1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf POFUT1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: POFUT1: sc-271026
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
POFUT1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406276-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
POFUT1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406276-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POFUT1 kodiert die Protein-O-Fucosyltransferase 1, eine im endoplasmatischen Retikulum lokalisierte Glykosyltransferase, die die O-Fucosylierung von EGF-ähnlichen Wiederholungen (epidermal growth factor–like repeats) auf ausgewählten sezernierten und membranständigen Proteinen katalysiert. Diese Modifikation ist entscheidend für das korrekte Falten, den Transport (Trafficking) und die ligandenabhängige Signalübertragung von Notch-Rezeptoren sowie anderer Proteine mit EGF-Repeats. Dadurch wird die Aktivität von POFUT1 mit der Regulation des Notch-Signalwegs und Zellschicksalsentscheidungen verknüpft. Eine veränderte POFUT1-Funktion kann die Qualitätskontrolle von Glykoproteinen und die Stärke der Notch-Signale stören – Prozesse, die mit Entwicklungsphänotypen und krankheitsassoziierter Fehlregulation der Differenzierung in Zusammenhang stehen. POFUT1 wird daher häufig in Kontexten wie der epithelialen Homöostase, der Spezifizierung hämatopoetischer und neuraler Zelllinien sowie glykosylierungsabhängigen Signalnetzwerken untersucht.
POFUT1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des POFUT1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von POFUT1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die POFUT1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit POFUT1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.