POD-1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402890-LAC

TCF21 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor POD-1, einen schicksalsbestimmenden Regulator von mesenchymalen und stromalen Differenzierungsprogrammen. POD-1 moduliert transkriptionelle Netzwerke, die das epithelial–mesenchymale Signaling, den Umbau der extrazellulären Matrix und die Organmorphogenese steuern, mit nachgelagerten Auswirkungen auf die Festlegung des Zellschicksals und die gewebespezifische Genexpression. Eine veränderte TCF21/POD-1-Aktivität wurde mit fehlregulierten Entwicklungswegen und Veränderungen des Differenzierungszustands in Verbindung gebracht, die für Fibrose, Tumor–Stroma-Interaktionen sowie die kardiovaskuläre und renale Biologie relevant sind. Als endogener transkriptioneller Regulator bietet POD-1 einen mechanistischen Ansatzpunkt, um Enhancer–Promoter-Kontrolle und kontextabhängige Transkriptionsfaktor-Funktionen in humanen Zellen zu untersuchen.

POD-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente TCF21-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

POD-1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der TCF21-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen POD-1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen TCF21-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.