Plasmide CRISPR/Cas9 KO PNMTase (h): sc-406591

Présentation

PNMT (phényléthanolamine N‑méthyltransférase) code la PNMTase, enzyme terminale de la biosynthèse des catécholamines, qui catalyse la conversion de la noradrénaline en adrénaline en utilisant la S‑adénosyl‑L‑méthionine comme donneur de groupement méthyle. L’activité de la PNMTase relie la signalisation neuroendocrine médullosurrénalienne et sympathique aux réponses cellulaires au stress, en s’intégrant aux programmes transcriptionnels régulés par les glucocorticoïdes ainsi qu’au métabolisme plus large de la tyrosine. En modulant la disponibilité de l’adrénaline, PNMT influence en aval les voies de signalisation des récepteurs adrénergiques qui affectent des processus cardiovasculaires, métaboliques et neurocomportementaux. Des altérations de l’expression ou de la régulation de PNMT ont été associées à une homéostasie des catécholamines perturbée dans des phénotypes liés au stress et dans des contextes de maladies endocriniennes et neuropsychiatriques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PNMTase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PNMT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PNMT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PNMT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PNMTase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PNMT pour l'étude de la signalisation de PNMTase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PNMT essentiels à la fonction de PNMTase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PNMT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PNMTase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PNMTase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PNMT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PNMTase plasmide HDR (h) et le PNMTase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PNMT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PNMT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.