PLU-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403771-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PLU-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PLU-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und PLU-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KDM5B abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PLU-1: sc-517291
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PLU-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403771-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PLU-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403771-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM5B kodiert die Histon-Lysin-Demethylase PLU-1 (JARID1B), eine H3K4me3/2-Demethylase, die Promotor- und Enhancer-Chromatinzustände moduliert, um Transkriptionsprogramme zu steuern, die den Zellzyklusverlauf, die Linienfestlegung und die Differenzierung kontrollieren. Über seine katalytische JmjC-Domäne und chromatininteragierende Regionen koordiniert PLU-1 epigenetische Repression und interagiert mit Transkriptionsregulatoren, um Genexpressionsausgänge zu formen. Eine fehlregulierte KDM5B-Aktivität wurde in mehreren Tumorkontexten mit veränderter Proliferation, der Aufrechterhaltung der Zellidentität und transkriptioneller Plastizität in Verbindung gebracht, wodurch KDM5B zu einem zentralen Knotenpunkt der epigenetischen Kontrolle onkogener und entwicklungsbezogener Signalwege wird. Als chromatinmodifizierendes Enzym wird PLU-1 häufig in Zusammenhang mit Mechanismen des transkriptionellen Gedächtnisses, replikationsgekoppeltem Chromatin-Remodeling und resistenzassoziierten zellulären Zuständen untersucht.
PLU-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KDM5B-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KDM5B abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KDM5B-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KDM5B-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.