Plk CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400411-ACT

Das humane **PLK1**-Gen kodiert die Polo-like Kinase 1 (Plk), eine Serin/Threonin-Kinase, die den Eintritt in die Mitose und deren Ablauf koordiniert, indem sie die Reifung der Zentrosomen, den Aufbau eines bipolaren Spindelapparats, die Anheftung von Kinetochoren an Mikrotubuli und die Zytokinese reguliert. Die PLK1-Aktivität ist in die CDK1–Cyclin-B-Signalgebung sowie in Phosphorylierungsnetzwerke eingebunden, die die Chromosomensegregation und den Spindelassemblierungs-Checkpoint steuern. Eine fehlregulierte PLK1-Expression oder -Aktivität stört die genomische Stabilität und die Zellzykluskontrolle – Eigenschaften, die häufig in schnell proliferierenden Zellzuständen und tumorassoziierten Phänotypen untersucht werden. Als zentraler Knotenpunkt der mitotischen Signalübertragung wird PLK1 in Studien zu Proliferation, Checkpoint-Regulation und mitoseassoziierten Stressantworten häufig als funktioneller Readout verwendet.

Plk Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PLK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Plk Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PLK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PLK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Plk-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PLK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Plk-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Plk-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PLK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.