Plfr CRISPR Activation Plasmid (m): sc-422306-ACT

Das Mausgen **Prl7d1** kodiert **Prolactin-Familie 7, Unterfamilie d, Mitglied 1 (Plfr)**, ein in der Plazenta angereichertes, zytokinähnliches, sezerniertes Protein, das an der Differenzierung von Trophoblasten und der Biologie der maternalen–fetalen Grenzfläche beteiligt ist. Als Teil der erweiterten Prolactin-/Wachstumshormon-Familie der Nager wird Plfr mit endokrinen und parakrinen Signalprozessen in Verbindung gebracht, die die Dezidualisierung, das vaskuläre Remodeling der Plazenta und die Immunmodulation während der Schwangerschaft beeinflussen. Eine dysregulierte Expression plazentarer Gene der Prolactin-Familie wird in Studien zu Implantationsversagen, abnormer Plazentation, fetaler Wachstumsrestriktion und schwangerschaftsassoziierter Entzündung häufig als molekularer Readout verwendet. **Prl7d1** dient daher als nützlicher Marker und funktioneller Knotenpunkt zur Aufschlüsselung plazentarer genregulatorischer Netzwerke und der Reproduktionsphysiologie in Mausmodellen.

Plfr Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Prl7d1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Plfr Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Prl7d1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Prl7d1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Plfr-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Prl7d1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Plfr-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Plfr-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Prl7d1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.