Plasmide CRISPR d'Activation (m) plexin-B2: sc-431226-ACT

Le gène murin **Plxnb2** code la plexine-B2, un récepteur transmembranaire des sémaphorines qui assure une signalisation dépendante du contact afin de réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et le guidage axonal. La plexine-B2 mobilise des voies de petites GTPases, notamment la signalisation de la famille Rho, pour coordonner la dynamique de l’actine, la croissance des neurites et l’organisation des tissus au cours du développement. Outre ses fonctions dans le câblage neuronal, l’activité de **Plxnb2** a été associée à la morphogenèse épithéliale et à des comportements cellulaires invasifs qui recoupent des programmes de signalisation pertinents pour le développement et le cancer. Moduler l’expression de la plexine-B2 est donc utile pour disséquer les réseaux de signalisation sémaphorine–plexine et leurs effets sur la polarité cellulaire, la motilité et la différenciation dans des systèmes modèles murins.

plexin-B2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Plxnb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

plexin-B2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Plxnb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Plxnb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de plexin-B2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Plxnb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de plexin-B2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie plexin-B2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Plxnb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.