PLC η2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409214

Descripción general

PLCH2 codifica la fosfolipasa C eta 2 (PLC η2), una enzima específica de fosfoinosítidos que hidroliza PIP2 para generar IP3 y diacilglicerol, acoplando así la señalización de lípidos de membrana con la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C. Como modulador del recambio de fosfoinosítidos, PLC η2 contribuye al control dependiente de Ca2+ de la transducción de señales, la remodelación del citoesqueleto y el tráfico vesicular en células humanas. La alteración de la señalización lipídica vinculada a PLC es ampliamente relevante para la desregulación de la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés, lo que convierte a PLCH2 en un nodo útil para investigar la reconfiguración de vías en fenotipos celulares asociados a enfermedad. El estudio de PLC η2 puede ayudar a dilucidar cómo la dinámica de PIP2/IP3/DAG moldea programas transcripcionales posteriores y redes efectoras dependientes de calcio.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PLC η2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLCH2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLCH2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLCH2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PLC η2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLCH2 para la investigación de la señalización de PLC η2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PLCH2 críticos para la función de PLC η2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLCH2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PLC η2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PLC η2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLCH2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PLC η2 (h) y el plásmido HDR PLC η2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLCH2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLCH2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.