Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PLC β3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401181
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PLC β3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PLC β3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PLC β3 Anticuerpo (D-7): sc-133231
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PLC β3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401181 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PLCB3 codifica la fosfolipasa C beta 3 (PLC β3), un efector asociado a la membrana situado aguas abajo de las señales de los GPCR y de ciertos receptores tirosina quinasa, que hidroliza PIP2 para generar los segundos mensajeros IP3 y DAG. Esta reacción impulsa la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de la proteína quinasa C, configurando programas de transducción de señales que regulan la proliferación, la migración, la secreción y la función de las células inmunitarias. La actividad de PLC β3 se integra con la señalización del calcio, las cascadas MAPK y la remodelación del citoesqueleto, conectando las señales extracelulares con respuestas transcripcionales y metabólicas. La desregulación de la señalización asociada a PLCB3 se ha implicado en contextos oncogénicos e inflamatorios, lo que la convierte en un nodo útil para desentrañar la arquitectura de las vías en modelos celulares relevantes para la enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PLC β3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLCB3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLCB3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLCB3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PLC β3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLCB3 para la investigación de la señalización de PLC β3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PLCB3 críticos para la función de PLC β3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLCB3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PLC β3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PLC β3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLCB3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PLC β3 (h) y el plásmido HDR PLC β3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLCB3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLCB3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.