Plasmide CRISPR d'Activation (h) PLAC1: sc-403605-ACT

PLAC1 (placenta-specific protein 1) est une protéine membranaire enrichie dans le trophoblaste, impliquée dans le développement placentaire et la biologie de l’interface materno-fœtale. Dans les tissus humains, son expression est généralement limitée aux compartiments placentaires, tandis qu’une expression ectopique a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux, ce qui étaye son utilisation comme marqueur de programmes de différenciation altérés. PLAC1 a été associé à des processus influençant l’adhésion cellulaire, la prolifération et la signalisation immunitaire à la surface cellulaire, bien que ses partenaires mécanistiques précis puissent varier selon le système modèle. L’expression dérégulée de PLAC1 est étudiée en biologie de la reproduction et en recherche sur le cancer afin d’explorer le contrôle transcriptionnel, l’identité de lignée et les interactions avec le microenvironnement.

PLAC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLAC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PLAC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLAC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLAC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PLAC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLAC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PLAC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PLAC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PLAC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.