PKLR Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422273

Descripción general

El gen murino **Pklr** codifica la piruvato quinasa hepática y de glóbulos rojos (PKLR), una enzima glucolítica que cataliza la conversión de fosfoenolpiruvato en piruvato con generación concomitante de ATP. La actividad de PKLR ayuda a controlar el flujo glucolítico, la disponibilidad de piruvato para el metabolismo mitocondrial y el equilibrio energético celular, con especial importancia en las células eritroides, donde la glucólisis es una fuente dominante de ATP. La regulación de PKLR se cruza con programas de detección de nutrientes y de control transcripcional que modulan el metabolismo de los carbohidratos, incluidas vías sensibles a la insulina y de adaptación a la hipoxia. La alteración de la función de PKLR se asocia con disfunción metabólica de los glóbulos rojos y fenotipos de anemia relacionados, lo que convierte a **Pklr** en un nodo útil para estudiar respuestas al estrés metabólico y la fisiología eritrocitaria en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PKLR (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Pklr en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Pklr junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Pklr tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PKLR.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Pklr para la investigación de la señalización de PKLR, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Pklr críticos para la función de PKLR
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Pklr para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PKLR CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PKLR CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Pklr. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PKLR (m) y el plásmido HDR PKLR (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Pklr para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Pklr definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.