PKD2 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-430381-LAC-2

Das Mausgen Prkd2 kodiert die Proteinkinase D2 (PKD2), eine Serin/Threonin-Kinase der PKD-Familie, die Signale nachgeschaltet von Diacylglycerol und neuartigen PKC-Isoformen weiterleitet, um Phosphorylierungsprogramme zu koordinieren, welche Genexpression, Vesikeltransport, Zytoskelettdynamik und Zellüberleben steuern. Die PKD2-Aktivität ist häufig mit dem Golgi-Apparat und membranassoziierter Signalgebung verknüpft und integriert Signale aus GPCR- und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwegen, um MAPK- und NF-κB-assoziierte Antworten sowie stimulusabhängige zelluläre Umbaureaktionen zu regulieren. Eine Fehlregulation der PRKD2/PKD2-Signalübertragung wurde in der Krebsbiologie mit aberranter Proliferation, inflammatorischer Signalgebung und metastatischen Eigenschaften in Verbindung gebracht, außerdem mit weiter gefassten Rollen in Stress- und immunbezogenen Prozessen. Das Gene Editing von Prkd2 in Mausmodellen ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Funktion der Kinasedomäne, des Pathway-Crosstalks und phosphorylierungsabhängiger Phänotypen mittels Proteomik, Lebendzellmikroskopie und in vivo krankheitsrelevanter Paradigmen.

PKD2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Prkd2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PKD2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Prkd2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PKD2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Prkd2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.