PKAγ cat CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400874

Übersicht

PRKACG kodiert die katalytische Gamma-Untereinheit der cAMP-abhängigen Proteinkinase A (PKAγ), eine Serin/Threonin-Kinase, die vielfältige Substrate phosphoryliert, um cAMP-Signale in zelluläre Antworten zu übersetzen. Durch die Regulation über PKA-Regulatoruntereinheiten und A-Kinase-Ankerproteine trägt PKAγ zur räumlichen Kompartimentierung der Signalübertragung bei und moduliert Prozesse wie Stoffwechsel, Transkriptionsprogramme, Zytoskelettdynamik und Ionenkanalaktivität. Diese Kinaseaktivität ist mit der GPCR–Adenylylcyclase–cAMP-Signalgebung und nachgeschalteten Signalwegen wie der CREB-abhängigen Genexpression sowie dem Crosstalk mit MAPK-Netzwerken verknüpft. Eine Fehlregulation der cAMP/PKA-Signalübertragung wird mit mehreren krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter veränderte proliferative Signalgebung, endokrine und metabolische Störungen sowie Änderungen der neuronalen Erregbarkeit, was mechanistische Studien zur Funktion von PRKACG in menschlichen Zellen unterstützt.

Das PKAγ cat CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PRKACG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PRKACG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PRKACG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PKAγ cat-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PRKACG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PKAγ cat-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PRKACG-Exone abzielen, die für die PKAγ cat-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PRKACG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PKAγ cat CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PKAγ cat CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PRKACG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PKAγ cat HDR-Plasmid (h) und PKAγ cat HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PRKACG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PRKACG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.