Plásmido CRISPR de Activación (h) PKAβ cat: sc-400649-ACT

PRKACB codifica la subunidad catalítica beta de la proteína quinasa A dependiente de AMPc (PKAβcat), una quinasa central de serina/treonina que traduce las señales de AMPc en programas de fosforilación que controlan el metabolismo, la transcripción, la progresión del ciclo celular y la plasticidad sináptica. Tras la elevación de AMPc inducida por GPCR, las subunidades catalíticas de PKA se disocian de las subunidades reguladoras para fosforilar sustratos como CREB y otros efectores de la vía, integrando señales a través de MAPK/ERK, la regulación de canales iónicos y la dinámica mitocondrial. La actividad de PRKACB influye en la diferenciación celular y en las respuestas al estrés, y la alteración de la señalización AMPc–PKA se ha vinculado con un control del crecimiento desregulado y con fenotipos neurobiológicos en múltiples contextos de enfermedad. Como nodo central de la señalización por AMPc, PRKACB se estudia con frecuencia para desentrañar la arquitectura de la vía, la regulación por retroalimentación y las salidas transcripcionales dependientes de la fosforilación en células humanas.

PKAβ cat El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKACB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PKAβ cat El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKACB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKACB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PKAβ cat. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKACB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PKAβ cat en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PKAβ cat en células tumorales con expresión de PRKACB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.