Particules Lentivirales d'Activation (h) PIWIL2: sc-402211-LAC

PIWIL2 code une protéine Argonaute de la famille PIWI qui se lie aux piARN afin de réguler le silençage génique guidé par de petits ARN, contribuant à la répression des transposons, à la stabilité du génome et au contrôle épigénétique de la transcription. Dans les cellules humaines, PIWIL2 est associé au traitement des ARN, à une régulation liée à la chromatine et au maintien de programmes propres à la lignée germinale, avec des rôles émergents dans les états de type « stem » et la différenciation cellulaire. Une expression dérégulée de PIWIL2 a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux et est fréquemment étudiée en lien avec la prolifération, l’invasion et des voies de signalisation altérées gouvernant le destin cellulaire. Ainsi, PIWIL2 constitue une cible utile pour explorer la biologie de la voie des piARN, la régulation des ARN non codants et les mécanismes qui couplent la surveillance du génome à des phénotypes oncogéniques.

Les particules d'activation lentivirales PIWIL2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PIWIL2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PIWIL2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PIWIL2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PIWIL2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PIWIL2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.