Plasmide CRISPR d'Activation (h) PITSLRE B: sc-402477-ACT

CDK11A code la kinase cycline‑dépendante PITSLRE B, une kinase sérine/thréonine impliquée dans la coordination de la progression du cycle cellulaire avec le traitement des ARN et le contrôle transcriptionnel. PITSLRE B a été associée à la régulation de l’épissage du pré‑ARNm, à des événements mitotiques et à une signalisation sensible au stress, ce qui concorde avec un rôle dans le maintien de l’homéostasie proliférative. En tant que régulateur de la famille des CDK, une activité altérée de CDK11A peut influencer des voies impliquées dans le contrôle des points de contrôle, l’apoptose et les programmes d’expression génique, fréquemment dérégulés dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs. Ces propriétés font de CDK11A/PITSLRE B une cible utile pour étudier les mécanismes de division cellulaire, le couplage transcription–épissage et des phénotypes de viabilité dépendants du contexte dans des modèles cellulaires humains.

PITSLRE B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDK11A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PITSLRE B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDK11A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDK11A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PITSLRE B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDK11A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PITSLRE B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PITSLRE B dans les cellules tumorales présentant une expression de CDK11A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.