Particules Lentivirales d'Activation (m) PiT1: sc-422988-LAC

Le gène murin **Slc20a1** code **PiT1 (SLC20A1)**, un symporteur sodium-dépendant du phosphate inorganique (Pi) qui assure l’absorption cellulaire de phosphate nécessaire à la biosynthèse des nucléotides, au renouvellement des phospholipides membranaires et au maintien de l’homéostasie bioénergétique. PiT1 contribue à la détection du phosphate et à une signalisation sensible aux nutriments, en interaction avec des programmes de contrôle du métabolisme et du cycle cellulaire qui influencent la prolifération et la survie. Au cours du développement et de l’entretien des tissus adultes, l’activité de PiT1 est associée aux états de différenciation et à la disponibilité du phosphate extracellulaire, des processus pertinents pour l’étude de la gestion des ions minéraux, du remodelage tissulaire et du stress métabolique. Des altérations du transport du phosphate et des voies associées à PiT1 ont été étudiées dans des contextes tels que la biologie des calcifications squelettiques et vasculaires, le métabolisme des cellules tumorales et les microenvironnements inflammatoires, soutenant des recherches mécanistiques sur des phénotypes dépendants du phosphate.

Les particules d'activation lentivirales PiT1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Slc20a1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PiT1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Slc20a1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PiT1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Slc20a1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.