PIPK I α Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403490

Descripción general

PIP5K1A codifica la fosfatidilinositol-4-fosfato 5-quinasa de tipo I alfa (PIPK I α), una quinasa lipídica clave que genera fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PI(4,5)P2) en la membrana plasmática y en endomembranas. Al controlar la disponibilidad de PI(4,5)P2, PIPK I α regula la remodelación del citoesqueleto de actina, la endocitosis mediada por clatrina, la dinámica de las adhesiones focales y el acoplamiento de la señalización de receptores a vías downstream como PLC y PI3K. La señalización de fosfoinosítidos dependiente de PIP5K1A influye en el tráfico de membranas y la migración celular, procesos que con frecuencia se ven alterados en la biología tumoral y en fenotipos invasivos. La actividad alterada de PIP5K1A también se ha vinculado con una señalización desregulada de factores de crecimiento y con respuestas inflamatorias, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos del comportamiento celular asociado a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PIPK I α (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PIP5K1A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PIP5K1A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PIP5K1A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PIPK I α.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PIP5K1A para la investigación de la señalización de PIPK I α, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PIP5K1A críticos para la función de PIPK I α
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PIP5K1A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PIPK I α CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PIPK I α CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PIP5K1A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PIPK I α (h) y el plásmido HDR PIPK I α (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PIP5K1A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PIP5K1A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.