PIP5KIII CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402813-ACT

PIKFYVE は、ホスファチジルイノシトール3-リン酸 5-キナーゼIII型（PIP5KIII）をコードしており、PI(3,5)P2 を産生する脂質キナーゼとして、エンドリソソーム膜の同一性維持、小胞輸送、リソソーム恒常性を支えます。PIP5KIII は PIKFYVE–VAC14–FIG4 複合体の一部として機能し、エンドソーム成熟、オートファジーフラックス、栄養応答性シグナル伝達を制御することで、ホスホイノシチド代謝と細胞ストレス適応を結び付けています。この経路が破綻すると、液胞／リソソームのダイナミクスが変化し、神経変性および神経筋系の表現型と関連することから、PIKFYVE は膜輸送異常の研究における重要な結節点となります。ヒトにおける PIKFYVE の制御は、エンドソームソーティングに依存する病原体侵入、受容体ターンオーバー、代謝シグナル伝達の解析においても重要です。

PIP5KIII CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PIKFYVEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PIP5KIII CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PIKFYVE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPIKFYVE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PIP5KIIIの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPIKFYVE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPIP5KIII依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPIKFYVE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPIP5KIII経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。