PINK1 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400739-LAC

PINK1 (PTEN-induzierte Kinase 1) kodiert eine auf die Mitochondrien gerichtete Serin/Threonin-Kinase, die eine Depolarisation der Mitochondrien erkennt und Programme der Qualitätskontrolle einleitet. Bei mitochondrialem Stress akkumuliert PINK1 an der äußeren Mitochondrienmembran und aktiviert eine PRKN/Parkin-abhängige Mitophagie, wobei es Ubiquitin-Signalgebung, Rekrutierung von Autophagosomen und den Abbau geschädigter Organellen koordiniert. PINK1 beeinflusst zudem die mitochondriale Dynamik, die Homöostase der oxidativen Phosphorylierung, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies sowie angeborene Stressantworten. Störungen in PINK1-regulierten Signalwegen sind stark mit Neurodegeneration assoziiert, insbesondere mit autosomal-rezessiver, früh beginnender Parkinson-Krankheit, und werden im Kontext mitochondrialer Dysfunktion und eines Versagens der Proteostase untersucht.

PINK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PINK1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PINK1 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PINK1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PINK1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PINK1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.