Plasmide Double Nickase (h) PINK1: sc-400739-NIC

PINK1 (kinase 1 induite par PTEN) code une kinase sérine/thréonine ciblée vers les mitochondries, qui agit comme un capteur clé des dommages mitochondriaux et comme un régulateur du contrôle qualité des organites. Lors de la perte du potentiel de membrane mitochondrial, PINK1 s’accumule sur la membrane externe des mitochondries et favorise l’ubiquitination, dépendante de PARKIN, de substrats mitochondriaux, déclenchant la mitophagie et le remodelage de la dynamique mitochondriale. Par cette voie, PINK1 influence les réponses au stress oxydatif, l’homéostasie bioénergétique et la signalisation inflammatoire associée au dysfonctionnement mitochondrial. Une altération de l’activité de PINK1 est fortement associée à la maladie de Parkinson à début précoce et fait l’objet de nombreuses études dans des modèles de neurodégénérescence et de pathologie mitochondriale.

PINK1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PINK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PINK1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PINK1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PINK1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.