PIMT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407101

Übersicht

Human TGS1 kodiert die Trimethylguanosin-Synthase 1 (PIMT), eine SAM-abhängige Methyltransferase, die die 2,2,7-Trimethylguanosin-(TMG)-Kappe auf snRNAs und anderen kleinen nukleären RNAs erzeugt. Diese Modifikation unterstützt die Reifung von snRNPs, den nukleären Import und die Funktion des Spleißosoms und verknüpft die TGS1-Aktivität mit der Genauigkeit des prä-mRNA-Spleißens sowie mit umfassenderen Netzwerken der RNA-Prozessierung. TGS1 ist zudem mit Mechanismen der RNA-Qualitätskontrolle und der Ribonukleoprotein-Biogenese verbunden, die die Proteostase und Stressantworten beeinflussen. Eine Fehlregulation des RNA-Stoffwechsels und spleißassoziierter Programme legt eine Beteiligung von TGS1/PIMT an Mechanismen nahe, die für Neurodegeneration, Krebsbiologie und Entwicklungsphänotypen relevant sind, und macht es zu einem nützlichen Knotenpunkt für pfadorientierte Studien.

Das PIMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TGS1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TGS1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TGS1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIMT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TGS1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIMT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TGS1-Exone abzielen, die für die PIMT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TGS1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PIMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIMT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TGS1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIMT HDR-Plasmid (h) und PIMT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TGS1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TGS1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.