Pim-1 Double Nickase Plasmid (m): sc-422237-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Pim-1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Pim-1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Pim-1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pim1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Pim-1: sc-374116
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Pim-1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pim-1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Pim1 kodiert die Serin/Threonin-Kinase Pim-1, ein konstitutiv aktives Signalenzyme, das das Überleben von Zellen, ihre Proliferation und die metabolische Anpassung moduliert. Pim-1 phosphoryliert Substrate, die an der Zellzyklus-Kontrolle und Apoptose beteiligt sind, darunter Regulatoren der Translation und von Stressantworten, und kooperiert mit Wachstumsfaktor- und Zytokin-Signalen, um die Funktion hämatopoetischer und immunologischer Zellen zu prägen. Als nachgeschalteter Effektor, der häufig mit onkogenen transkriptionellen Programmen verknüpft ist, wird Pim-1 in Signalwegen untersucht, die auf MYC-Aktivität, mTOR-abhängige Proteinsynthese und Resistenz gegenüber zellulärem Stress konvergieren. Eine Fehlregulation der Pim1/Pim-1-Aktivität wurde in mehreren Modellsystemen mit maligner Transformation und Tumorprogression in Verbindung gebracht, was Pim-1 zu einem häufigen Ziel mechanistischer Studien zur Kinase-Signalgebung und Onkogenese macht.
Pim-1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pim1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pim1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pim1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pim1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.